胰酶 能水解细胞间的蛋白质,破坏细胞间的连接,从而加速细胞与瓶壁间的脱离速度。在ph 8.0和37℃时,胰酶的作用能力最强,因此使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。
用胰酶消化细胞一般都是要加含血清的培养基去终止消化的,胰酶的活性就被血清中和了,再加上洗涤细胞两次,胰酶就不会再对细胞造成损伤。 但是,审稿人的意思是说胰酶消化的过程中会对表明marker表达有影响。
【求助】今天给细胞传代时发现胰酶的颜色变成了桔黄色,看起来和1640的颜色差不多,一测ph值,果然变酸了ph6.5,现有一疑问:胰酶为何会变酸,是不是污染了(我每次从4度冰箱取出放孵箱升温)我已经用它
请问你的胰蛋白酶干粉是怎么保存的呢?你还可以看看你的胰蛋白酶的保质期,看看是不是过期了。要不然应该是很容易溶解的,我们通常都不怎么要用磁力搅拌器就可以完全溶解。另外chenxinxia战友说的要调整PH值,我不知道这个步骤是不是必须的。
不是不能用胰酶消化是不能用含有EDTA的胰酶消化,因为annexinV是 Ca依赖的蛋白,所以不能加入EDTA, 防止EDTA螯合了Ca离子从而影响annexinV,进而影响结果。所以你可以用不含EDTA的胰酶,放入温箱内进行消化,时间可以长一点,随时观察细胞情况,避免消化过度。
看你种的细胞多少了即是你的细胞密度,一般15-30ml就可以了。消化时,向培养瓶中加入适量胰酶,个人经验,一般10cm培养皿加入0.5ml足已,加入后,立刻摇晃培养皿,使胰酶铺满,一旦铺满,立刻用负压吸引器吸去多余的胰酶,再放入37度培养箱消化。
因为TPCK- Trypsin 在24h 后可能被细胞产生的因子所抑制,不能很好地切割HA ,因此分时段加入胰酶对流感病毒的复制是十分重要的。 另外,流感病毒的最适pH 为7~8 ,在孵育过程中常常由于细胞代谢导致培养基酸化,因此分时段加入NaHCO3 使pH 维持在7~8 左右,有利于流感 ...
我那时候没经验,EDTA没消化下来,就改用了冷泉港实验室的一个protocol,里面是用胰蛋白酶消化,按照protocol,先消化几分钟,换新鲜的胰酶,过几分钟,再换新鲜的胰酶,过二十多分钟直接用胰酶吹下来的,有一盘就还可以细胞能用,但是又一盘就完全不行,细胞彻底变圆了,因为我是 …
2024年3月13日 · 胰蛋白酶和胶原酶是使用最广泛地用于组织消化获取组织单个细胞的酶,当然也含有其它的一些酶,例如脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DeoxyribonucleaseⅠ, DNaseⅠ)在细胞分离过程配合其它酶一起使用(不单独使用, 最常用的配合消化酶 ),用于细胞死亡后释放的DNA消除,对细胞完整性无消化能力,防止胞外DNA ...
你的PBS调PH值了吧?胰酶要在偏碱条件下才溶。我用D-Hanks液溶,PH值调在7.2左右。前段时间我发现我一直用的胰酶不溶了,换了新的胰酶就溶解了,不知道为什么,可能是失效了?有人配胰酶的时候PH值要到8.0。